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ゲノム編集細胞株作成支援

(293T細胞を例にしております。特殊な培養条件が必要な細胞株については、予めご相談ください)

黒字部分はゲノム編集部門側が担当し、赤字部分は依頼者側に実施して頂きます。

KO細胞株 

1. gRNA発現ベクターを作製する。

2. Cas9, gRNA発現ベクターを目的の細胞株に遺伝子導入する。

3. 薬剤選択またはFACS sortingを行いクローン化する。

4. 各クローンからゲノムDNAを抽出し、genotyping PCRを行う。

5. Positive cloneのゲノム配列をシーケンスし、stopコドンを確認する。

6. 抗体があればWBでタンパク質発現を確認する。

KI細胞株

1. gRNAベクターの作製。ドナーベクターの作製。デザインについては予めご相談ください。

2. Cas9, gRNAベクター,ドナーベクターを目的の細胞株に遺伝子導入する。

3. 薬剤選択またはFACS sortingを行いクローン化する。Sortingをご希望の場合は、綜研利用料をご負担いただければこちらで行います。

4. 各クローンからゲノムDNAを抽出し、genotyping PCRを行う。

5. Positive cloneのゲノム配列をシーケンスし、stopコドンを確認する。

6. 抗体があればWBでタンパク質発現を確認する。